Кусочек ткани для световой микроскопии фиксировался в течение 12-24 ч, обезвоживался и заливался в парафин. Кусочки для заливки в эпоксидные смолы после фиксации в 4%-ном растворе параформальдегида промывались в трех порциях фосфатного буфера Миллонига (рН 7,2-7,4) в течение 30 мин. Далее следовала фиксация в 1%-ном растворе четырехокиси осмия в течение 1,5-2 ч. После фиксации кусочки быстро промывали в двух сменах буферного раствора, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, проводили через эфир (или пропиленоксид) и заливали в эпоксидные смолы. Мы пользовались смесью эпона. Если возникала необходимостьотложитьпроводку биоптатов, мы хранили материал в 4%-ном растворе параформальдегида при температуре 4°С, контролируя величину рН. С парафиновых блоков готовились срезы толщиной 3-5 мкм. С каждого блока, залитого в эпоксидные смолы, вначале готовились полутонкие срезы (1 мкм), а затем ультратонкие. Полутонкие срезы окрашивали толуидиновым синим или азуром-2. Применялись 1%-ные растворы красителей, приготовленные на 1%-ном водном растворе буры, которая повышает рН до 9. Раствор красителя перед окраской подогревался до 60-70°С на водяной бане. Окрашивали капельно в течение 10 мин, споласкивали в двух порциях дистиллированной воды, после чего срезы высушивались в течение суток при комнатной температуре, затем около 4-5 мин просветлялись в ксилоле и заключались в полистерол. Для ультратонких срезов использовался классический метод двойного окрашивания цитратом свинда и урапилацетатом. При необходимости проводили реакцию с рутениевым красным для выявления внеклеточных кислых мукоидов (гликокаликса). Использовали метод Люфта но прописи Гайера (1974). В этих случаях часть биоптата фиксировали 1 ч при 4°С в 3,6%-ном растворе глютаральдегида (0,5 мл), 0,3%-ном водном растворе рутениевого красного (0,5 мл) и 0,5 М какодилатном буфере с рН 7,3 (0,5 мл).
Читать дальше
Артерии метафиза
Особенности кровоснабжения растущей кости и до настоящего времени многими рассматриваются как решающее условие для возникновения и распространения остеомиелита. Большое значение, кроме упомянутого выше, придается сегментарности строения сосудов кости (Вашулевски). Предполагается, что в зависимости от места остановки возбудителя в том или ином сегменте сосудистой системы кости возникает либо периостит, или кортикальный остеомиелит, либо медуллярный абсцесс, либо […]
Темпы траты желточных включений
Признание дивергенции как основного закона эмбрионального гистогенеза и тканевой эволюции (в полном соответствии с установленными Дарвином закономерностями эволюции организмов) с логической неизбежностью приводит к признанию естественной, генетической системы тканей (Н. Г. Хлопин, 1940а, 1943а, 1946). Морфофизиологическая классификация тканевых структур, господствующая в гистологии со времен Лейдига — Келликера и теоретически обоснованная А. А. Заварзиным (1934, 1941), […]
Избыточная продукция молочной кислоты
Избыточная продукция молочной кислоты при гипоксии приводит к ацидозу в клетках миокарда. В нормальных условиях рН сердечной мышцы имеет сравнительно малые величины, близкие к нижней границе нормы. Дополнительное снижение рН за счет молочной кислоты способно инактивировать множество ферментов, связанных с различными метаболическими процессами в клетке. Кроме того, углубление ацидоза и падение рН приблизительно до 6,0 […]